读论文氢水促进自身免疫性脑脊髓炎动物神

来源：本站原创
时间：2018-11-23 12:51:31

氢思语：英文不非常好的人，阅读文献最好的办法是全文翻译。

不熟悉科研，但对科研有兴趣的同事，可以认真反复阅读。常言说，读书破万卷，下笔如有神。这个也适用科研论文。不过要读懂科研论文，首先要知道这种八股文的八股格式，多读几篇就知道，就是题目摘要前言方法结果讨论文献这样的排列（次序有不同，也有压缩版）。

每个部分有特定目的，但论文有一个中心目的，例如这个文章，目的就是要用实验证明氢水能治疗动物多发性硬化。这个文章中，前言是说明为什么要做这个研究，首先是多发性硬化这个病很重要，虽然有一些药物，但副作用大，效果也不够理想，如果这个病不重要，或者有非常好的治疗方法，就没有必要研究氢气治疗了。而氢气治疗疾病是一个新进展，还没有对多发性硬化的认真研究，所以这个研究就证明氢气对多发性硬化的治疗作用。

然后是方法，就是为目的进行的实验，一般都是有套路的。例如这个研究，必须用动物瘫痪程度来说明氢气治疗和不治疗的差别，就是从症状上证明治疗效果。然后用这个病的特征性病理改变，神经脱髓鞘改变，从病理学上说明为什么有效果。因为这个疾病属于自身免疫性疾病，那么从免疫学细胞变化角度再进一步说明。可以说所有研究多发性硬化，都必须进行这方面的研究。不过考虑到发表论文或新或深的原则，这个文章基本是按照新的原则进行的，可惜新的不够。

研究结果，就是从这些实验中发现氢气效果确实不错。当然许多情况下，不一定全部的改变都符合预期，这非常正常。那么出现符合预期和不符合预期的结果，都可以在讨论中进行分析。讨论的目的是围绕研究结果，给读者讲道理，说明这个研究达到了目的，为什么是这样。那么会从研究结果情况，过去学者这方面的研究，为什么会有这样的作用，研究存在的不足，将来希望开展的研究等方面开展讨论。

上面内容中引用的文献，标记并罗列在后面。最后把所有内容中的干货简单总结，就是最前面题目作者后的摘要。

氢气治疗多发性硬化的研究，我认为非常值得深入了解，那么就全文翻译一遍，供英文不好，但又希望深入了解这个研究的同道参考。文章来自第二军医大学神经生物学教研室曹莉教授课题组。

摘要

多发性硬化（MS）是中枢神经系统（CNS）的慢性自身免疫性脱髓鞘疾病。目前由美国食品药物管理局批准通过的药物价格昂贵、给药不便、副作用大，不适用于多发性硬化的长期给药治疗。之前报道，氢分子（H2）具有抗氧化、抗细胞凋亡、抗炎、抗过敏以及抗肿瘤的作用。在本研究中，我们探讨了富氢水（HRW）对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）动物的预防性与治疗性作用。实验发现，0.36mM与0.89mM富氢水的预防性治疗均可以延迟EAE发作并且减轻疾病的严重程度。此外，在疾病发作时给予治疗性0.89mMHRW也可以减轻疾病的严重程度，并且减轻中枢神经系统炎性脱髓鞘的严重程度。此外，氢水治疗防止了CD4+T淋巴细胞浸润进入CNS，在不影响Th1细胞群的情况下可阻碍Th17细胞的增殖和分化。考虑到氢气无毒、价格便宜、便于给药和易于穿过血脑屏障的优点，我们的实验表明氢水在治疗MS上具有很大潜力。

（EAE可以理解为用动物制备的人类MS模型。）

关键词：多发性硬化；实验性自身免疫性脑脊髓炎；富氢水；CD4+T淋巴细胞；TH17

1.前言

多发性硬化（MS）是一种慢性自身免疫性疾病，以中枢神经系统（CNS）多病灶炎性脱髓鞘为主要病变特点（弗罗曼等，）。大多数MS的患者在初期经历复发-缓解相交替为特点的神经功能障碍，在10到15年后病程将会进入第二阶段（Lassmann等，）。目前的治疗方法尚不能治愈这种疾病，但是可以减少复发率以及减缓疾病进展以及其他临床活动标记，如磁共振成像（MRI）病变与脑萎缩（Stangel等，）。

因为经MRI探测到的炎性病变产生的伤害率比普通诊查到的疾病伤害率高十倍，通过免疫调节药物（DMDs）持续治疗，可以减少免疫攻击和神经损伤，而且已被证明是延缓疾病进展的有效方法（Miller等，）。然而，当前MS药物治疗不是普通大众能负担得起的，治疗MS的普通药物每年花费高达60,美元。一些药物需要患者每星期注射一次或多次，部分药物会产生非常严重的副作用。此外，免疫抑制药剂可能产生长期副作用（Castro-Borrero等，）。这些药物价格昂贵，给药不便以及副作用大，这些问题的存在通常使得其不适于MS患者的长期治疗。

氢气是存在与人体中的一种抗氧化剂气体。它无毒、价格便宜以及便于给药（饮用富氢水）。近年来，据报道氢气在预防和治疗应用中具有巨大潜力。大量研究人员已经开展了针对氢气的很多实验，结果发现，与其他物质相比，氢气具有抗氧化、抗细胞凋亡、抗炎以及抗过敏的功效（Zhang等，）。实验中，将富氢水放入小鼠脑切片培养基中33天后，结果显示，与对照组相比，富氢水可以极大减小过氧化物形成（Sato等，）。在牙周炎模型小鼠实验中，口服氢水4周后，血清中的活性氧（ROS）与氧化低密度脂蛋白胆固醇的水平都明显下降（Ekuni等，）。氢气的吸入治疗也被证实可以保护大脑免受缺血与再灌注导致的氧化应激所带来的伤害（Ohsawa等，）。然而，目前尚未有富氢水针对MS的治疗的报道。

本研究旨在探究氢水对MS疾病模型-实验性自身免疫性脑脊髓炎的潜在治疗作用。我们发现，氢水可以极大减轻疾病的严重程度。此外，氢水还可以阻止CD4+T淋巴细胞进入CNS，抑制Th17细胞增殖分化。我们的实验表明，氢水是一种针对MS治疗的全新的潜力药物。

2.材料与方法

2.1.动物与富氢水制备

我们从南京大学动物模型研究所购买了C57BL/6J小鼠（中国南京）。将所有实验用的小鼠养殖在特定的无菌条件下，在它们长至6到8周时用于实验。所有的动物实验都需要按照全国卫生指导研究所有关实验动物使用的要求以及第二军医大学委员会动物保护的要求执行。实验中使用的富氢水）由北京活力氢源饮品有限公司供应。LiHan等（Han等，）曾经确定了氢气浓度。在当前研究中，运用气相色谱分析并结合Ohsawa等提出的方式进一步确定氢的浓度（Ohsawa等，）。

2.2.自身免疫性脑脊髓炎的诱导与富氢水治疗

采用纯度为95%的髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG35-55）诱发自身免疫性脑脊髓炎。6-8周大的C57BL/6雌鼠皮下注射灭活的溶解分支结核杆菌的福氏完全佐剂中μg的MOG35-55（H37Ra应变；5mg/ml；Difco）。在第0天和第2天，使用PBS百日咳毒素（每只鼠ng；抗体-EMD化学药品）对小鼠进行腹腔注射。每天，研究人员在不考虑实验的条件下对小鼠做神经行为学评分，并按照0-5分值给它们打分；1分尾巴麻痹；2分局部麻痹（虚弱，一个或两个后肢不完全性截瘫）；3分下身麻痹（两个后肢完全性截瘫）；4分前肢无力截瘫或瘫痪；5分垂死或死亡。若小鼠的临床分值达到了4分，那么研究人员就会让小鼠安乐死。在MOG免疫发挥作用或第一次出现疾病迹象时，给低剂量组一天填喂两次0.36mM氢水（0.8ppm），然后给高剂量组一天填喂两次0.89mMHRW(2.0ppm)。每次确保每次给每只小鼠的HRW体积为20mg/Kg。每只小鼠所喂的氢分子最后剂量为低剂量组16mg/Kg，高剂量组40mg/Kg。用同样方式，将相同体积且经过温和搅拌的脱气水喂给控制组的小鼠。对于瘫痪小鼠，我们为它们提供充足的食物与水，方便它们食用。实验中，我们并未发现有5分值的小鼠，所有小鼠都没有遭受疾病和死亡的折磨，均以通过人为安乐死的方式结束了实验对象的生命。

2.3.组织学

在4%（w/v）多聚甲醛灌注入雌鼠心脏后，我们以人为安乐死的方式让其死亡，并将它们（n=4）的脊髓切了下来。之后，我们将脊髓用石蜡包埋起来，将经过清蜡和再水化处理的4μm厚的部分用苏木精、曙红（HE）或固蓝（LFB）染色以分别评估炎症与髓鞘脱失。我们从每只动物那里收集五个连续部分的每一部分。用LFB对其中一组染色，然后用0.5%的中性红进行对比染色。然后用HE溶液给另一组染色，并将其置于中性封片（费希尔科学）中。通过分析HE，计算渗透入脊髓部分每mm2的淋巴细胞和巨噬细胞的数量。通过LFB评分，用LFB染色的白质区阴影面积与白质区总面积之间的比值确定髓鞘脱失。按照不相干读者的盲检，对HE或LFB部分进行评分。每次实验中，被区别对待的实验组中，每个时间点上至少有四只小鼠。分别进行三次独立实验。

2.4.从CNS与引流淋巴结（DLNs）中分离出来的单核细胞

将正常或患有自身免疫性脑脊髓炎的小鼠的大脑与脊髓分离，均质化、过滤、分离，然后悬浮在70%的珀可（通用医疗）中，附上37%和30%的倾斜度。在37%和70%的Percoll界面上大部分喂单核细胞，将其收集起来。将自身免疫性脑脊髓炎小鼠的引流淋巴结DLNs收集合并，制备单细胞悬浮液。将细胞在5×细胞/孔的24个孔的U型底板中培养，RPMI完全培养基（包括10%FBS）（n=4）中的含10mg/mlMOG35–55缩氨酸。

2.5.细胞内染色和流式细胞术

试验中使用Cy5-共轭抗鼠CN4（克隆GK1.5，天津Sungene）。分析细胞内别藻蓝素-共轭抗鼠IFN-（克隆XMG1.2，BDBiosciences）与PE-共轭抗鼠IL-17A（克隆17F3，BDBiosciences）染色，在免疫后第20天，在GolgiPlug（BDBiosciences）存在状态下，用佛波醇12-十四酸盐13-醋酸盐（PMA）（50ng/mlSigma-Aldrich）和离子霉素（1mg/mlSigma-Aldrich）将细胞从DLN和CNS浸润物中分离。然后，如之前所述，对细胞进行固定、透明化处理与染色（Du等，9）。在流式细胞仪分析时，采用MofloXDP(BeckmanCoulter,Brea,CA,USA)。所用软件为CellQuestPro(BDBiosciences)或FlowJo(TreeStar,Ashland,OR)。

2.6.统计

在多个组中，使用单程ANOVA与Tukey统计检验，分析数据。使用非参数曼-惠特尼检验分析EAE模型，与其他两组进行比较。除非另有规定，否则最终数据应为中间值±SEM。p0.05意味着有统计学意义。

3.结果

3.1.氢水延迟EAE的发病与缓解疾病的严重程度

我们首先研究了富氢水对自身免疫性脑脊髓炎的预防性治疗作用。使用神经源性肽MOG35–55诱导自身免疫性脑脊髓炎。在MOG35–55免疫开始时，每天喂小鼠两次0.36mM的氢水。如图1A所示，同EAE对照组相比，氢水治疗行为学评分，显著减小。因此，预防性喂给小鼠0.36mM的HRW可以延缓EAE发病，减小临床行为学评分。

同时，我们使用0.89mM氢水研究高浓度的氢水是否会改善病症。自免疫之日起，每天给小鼠喂0.89mM氢水两次。经过0.89mM氢水治疗的小鼠的行为学评分显著下降（图1A表1）。同0.36mMHRW相比，0.89mM氢水的预防性治疗作用在缓解病情严重程度上更为有效（图1A）。这些数据显示了氢水对多发性硬化治疗作用的的剂量依赖性作用。

接下来，我们对氢水的治疗效果进行评估。从疾病第一个迹象出现开始每天两次进行给予0.89mM氢水。实验中我们可以观察到氢水治疗可以明显缓解病情严重程度，，行为学评分有了明显降低（图1B表2）。这些结果表明，氢水在多发性硬化发展过程中起到了抑制疾病进程的作用。

3.2.氢水抑制中枢神经系统的炎性浸润和脱髓鞘病变

为明确在体内氢水对炎症引发的脱髓鞘的影响，我们研究了CNS炎性浸润和髓鞘脱失的严重程度。结果发现，同控制组相比（图2A,C），0.36mM和0.89mM的氢水可以显著缓解EAE的CNS的脱髓鞘面积。同时，HE染色显示，病变部位的炎性浸润细胞相对较少（图2B,D）。统计结果显示，与控制组的小鼠比较，患有EAE的小鼠经过氢水预防性治疗后，脊髓中免疫细胞渗透和髓鞘损失的比例都减小了（图2C,D）。经过0.89mM氢水给药治疗的EAE小鼠的脊髓的脱髓鞘和炎症程度有了极大的改善（图3）。这些结果表明，氢水的预防性与治疗性治疗均可以缓解EAE的CNS病变程度。

3.3.氢水影响动物体内中的CD4+亚群的分布

为研究EAE时炎症细胞T分化是否也会受氢水影响，我们在免疫后的第20天，收集经过0.36mM和0.89mM氢水预防性治疗的小鼠与控制组中的小鼠的CD4+T细胞。我们检测了三组小鼠CNS中的CD4+T渗透性细胞，发现经过氢水预防性治疗的小鼠的CNS聚集的CD4+T细胞数量较少（图4A）。经过氢水预处理的小鼠上的CD4+T细胞的比例与绝对数量都很小，但是控制组中的却很高。此外，0.89mM氢水预防性治疗的小鼠CD4+T细胞的比例与绝对数量要比0.36mM氢水的少（图4B）。接下来，我们研究了氢水治疗性给药的对于EAE小鼠的CD4+T细胞的影响（图4C），结果发现，治疗组可以明显抑制CD4+T细胞，图4D所示为量化的比例与绝对数量。因此，从我们的数据中可以看到，氢水在CD4+T细胞发育中起到了抑制作用。

3.4.氢水在体内抑制Th17细胞发育

我们确定了CD4+细胞中的两个重要促炎性T细胞。根据IFN-γ+和IL-17A+在CNS和淋巴结（图5A）细胞内细胞因子染色，可以看到，与对照组相比，氢水治疗的小鼠的Th17细胞的绝对数量和比例明显减少（图5B,C）。虽然经过氢水处理的小鼠的Th1细胞的绝对数量也在减少，然而CD4+中的Th1比例并未改变（图5B,C）。这些结果表明，氢水治疗可以抑制Th17细胞发育。

4.讨论

研究发现，H2可以减轻实验动物模型中小鼠因伴刀豆球蛋白A、右旋糖酐硫酸酯钠、脂多糖、酵母聚糖和脓毒症而引发的炎症（Das等，）。H2也可以帮助风湿性关节炎患者实现功能恢复（Ishibashi等，）。我们的研究发现，氢水可以减小EAE的神经行为学评分。这一点表明，氢水可以治疗MS。

由于MS是一种慢性疾病，目前尚未出现有效治疗手段，而且由FDA批准通过的药物价格昂贵、给药不便、副作用大，不适用于长期治疗MS。氢气是一种存在于人类体内的无毒气体。很容易便可穿透血脑屏障和细胞膜（Itoh等，）。饮用富含氢的液体是一种新的氢气给药方式，因而很容易便为临床实践所用（Ishibashi等，）。此外，氢水与当前FDA批准通过的MS药物相比，对于普通人是可以承担的价格。因为氢气无毒、价格便宜而且易于给药，并且容易穿过血脑屏障，因此将其运用于MS患者的长期治疗中具有很大潜力。

MS免疫机制非常复杂（Kulkarni等，4；Mirshafiey和Jadidi-Niaragh）。CD4+T细胞在MS和EAE神经炎症过程中起到了重要作用。Th1和Th7细胞是疾病发展中主要的致病细胞（Sonobe等，；Tzartos等，）。我们当前的工作表明，氢水可以阻止CD4+T淋巴细胞渗透进CNS，减少Th1和Th17细胞的绝对数量，并且抑制Th17分化。除了T细胞外，巨噬细胞和小胶质细胞也在EAE发病过程中发挥了重要作用（Goldmann和Prinz）。据报道，减少小胶质神经细胞或巨噬细胞都可以极大缓解EAE的严重程度（Ponomarev等）。此外，也有研究表明，氢分子可以通过调节巨噬细胞中的信号传导，抑制LPS/IFN-γ-引发的NO释放，从而治疗小鼠的风湿炎症（Itoh等，）。因此，氢水对EAE的有益影响也有可能是通过其对巨噬细胞和小胶质细胞的抗炎作用来介导的。

氢水缓解了EAE的严重程度的可能机制如下。首先，证据表明，氢分子是一种有效的自由基清除剂（Ohta）。在EAE和MS上上的氧化应激会引发脱髓鞘和轴突损伤。很多研究已经表明，MS患者的自由基水平有所上升（Gilgun-Sherki等，4）。有报道指出，通过清除活性氧对EAE大鼠进行治疗，可以显著减轻疾病的严重程度（Martin与Near）。因此，氢水或可因其抗氧化特性从而对EAE发挥治疗作用。再次，有报道指出，氢水可以减少炎性因子，如以及高迁移率族蛋白b1（HMGB1），而抗炎性细胞因子IL-10的数量则会增加（Tian等，；Zhang等，）。在这些分子中，TNFα存在于MS患者的脑脊液中并且与疾病的严重程度相关（Sharief和Hentges）。在TNFα缺乏时，使用可溶性重组蛋白TNFR1-IgG或抗TNF抗体可以阻止EAE的进程。（Kassiotis和Kollias1；Kollias等）。除了TNFα外，我们还可以在MS患者的大脑和EAE模型大脑的脊髓液中观察到到上调的IL-1β（Bauer等）。经过IL-1ra的治疗，IL-1β活性下降，进而减轻了EAE的动物的神经功能缺陷的症状（Bettelli等;Ruuls等）。另外，我们在MS大脑组织中观察到了活化了的TNFR1和IL-1β的下游信号分子和NF-κB。针对MS大脑组织的分析识别了与NF-κB相关的基因表达的上调（Lock等2；Mycko等3）。抑制外围免疫细胞和CNS中的NF-κB可以在EAE中起到了保护作用，这一点表明，氢水的治疗效果可以在NF-κB途径中得到调节（Yan和Greer）。HMGB1是一种从坏死细胞（如MS损伤中的受损少突胶质细胞）中释放出来的普遍存在的核内蛋白。HMGB1会在EAE中产生神经炎症反应，抑制HMGB1信号从而改善疾病（Robinson等，）。IL-10也在EAE自身免疫损伤调节中扮演了重要角色，IL-10?/?小鼠对EAE的易感性正好证明了这一点（Bettelli等，），而IL-10过表达小鼠则可以表现对EAE诱导的强烈抵抗（Cua等）。脊髓中IL-10的增多与EAE症状的缓解相关，并且人体中IL-10的减少是MS的危险因素（Croxford等，1；Vandenbark等1）。因此，HRW对EAE的抑制作用可以通过其抗炎功能来进行调解，将TNFα、IL-1β、NF-κB、HMGB1上调，将IL-10下调。第三，饮用HRW也被认为是可以抑制血脑屏障损坏的一种方式，抑制了基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的活性（Sun等;Takeuchi等）。MMP-9在EAE中的主要作用加重炎症情况，破坏BBB，分裂髓磷脂蛋白，疾病修饰细胞因子激活或退化以及直接影响CNS细胞（Opdenakker等1）。有研究报道，从MS病人和EAE动物中的血清、脑脊液和大脑中发现MMP-9水平上升（Dubois等）。因此，氢水对EAE的有益影响或许可以归因于对MMP-9活性的抑制。

有关氢水调节Th17分化的分子机制仍不清楚。在转变生长因子(TGF)-β和IL-6存在的前提下，激活的T辅助细胞前体细胞分化成小鼠的Th17细胞（Hu等）。在人体中，TGF-β、IL-1β与IL-23诱导了Th17的分化（Valmori等）。有研究表明，在急性肺损伤中，H2可以明显减弱肺泡灌洗液中IL-1β和IL-6的表达（Liu等）。这点表明，HRW可能通过减少这种分子方式来抑制Th17分化。然而，我们仍需要对氢气治疗如何影响Th17分化的分子机制开展进一步研究。

总体上，当前工作确定了氢水对EAE发生与发展的预防和治疗效果。据我们所知，这是第一篇有关氢水可以通过抑制CNS和外周免疫器官中的Th17分化显著减少EAE行为学评分的报道。

图1

图1.经过HRW治疗的EAE的行为学评分。（A）自免疫之日起每天给予HRW(预防性用药0.36或0.89mM)两次；（B）在出现EAE临床症状开始，每天两次喂HRW（治疗性剂量0.89mM）。用相同方式，给对照组给予普通水。以上所有数据分别来自三个不同实验，每次实验中每组数量n=5-6。通过非参数曼-惠特尼检验进行统计分析。在统计学上具有显著意义。

图2

图2.将脊髓组织分别从经过HRW治疗的小鼠与对照组小鼠中分离出来进行组织形态学观察。（A）免疫20天后，预防性HRW（0.36和0.89mM）治疗的EAE小鼠的脊髓进行HE染色。LFB染色显示脊髓脱髓鞘情况。白质脱髓鞘病变部分用线标出。（B）治疗性HRW（0.36和0.89mM）治疗20天后，EAE小鼠脊髓的HE染色部分。箭头指向为炎性细胞浸润区域（HE）。比例尺为um。（C）EAE小鼠病变部位的脱髓鞘白质的比例柱状图。（D）EAE小鼠病变部位浸润细胞数量的柱状图。上述分别为三个实验中的数据（平均值），每个群体和每个实验均使用5只小鼠。用对照组进行对比（单向ANOVA统计检验）。

图3

图3.将脊髓组织分别从经过HRW治疗的小鼠与对照组小鼠中分离出来进行观察。（A）预防性治疗试验中中，在第20天，将经过HRW（0.89mM）治疗的EAE小鼠的脊髓HE染色结果。箭头指向为炎性细胞浸润区域（HE）。（B）治疗性给药中的HRW（0.89mM）与脊髓部分用LFB染色。箭头指向髓鞘脱失区域。比例尺为um。（C）EAE小鼠病变部位浸润细胞数量量化的柱状图。（D）EAE小鼠病变部位脱髓鞘白质（WM）总百分比柱状图。上述分别为三个实验中的数据（平均值），每个群体和每个实验均使用5只小鼠。用对照组进行对比（student检验）。

图4

图4.HRW治疗的小鼠的大脑与脊髓中分离得到的单核细胞浸润中的CD4+T细胞进行量化分析。（A）在经过MOGpeptide35–55免疫后，在EAE发病开始，使用0.36mMyu0.89mMHRW每天两次分别对小鼠进行治疗。以相同方式给控制组的小鼠喂水。在免疫20天后，利用流式细胞术评估大脑与脊髓中的浸润CD4+T细胞。如染色点所示。（B）（A）中浸润CD4+T细胞中的百分比与绝对值如图所示。（C）在免疫后，在EAE临床症状出现后开始，给小鼠每天喂两次0.89mMHRW。利用流式细胞术评估大脑与脊髓中的浸润CD4+T细胞。。(D)经过每天两次喂0.89mMHRW的小鼠的大脑和脊髓中浸润CD4+T细胞的百分比与绝对数量示意图。三次重复实验，每次试验每组老鼠数量为7只。在统计学还是那个具有显著意义。（单

图5

图5.CNS和淋巴结中IL-17A和IFN-γ胞内染色。（A）CNS和淋巴结的CD4+细胞在存在GolgiPlug条件下，受PMA和离子霉素刺激6个小时，然后用IL-17A和IFN-γ进行染色，如图所示。（B）按照统计学角度分析IL-17A+、IFN-γ+细胞的百分比与绝对数量。（C）按照统计学角度分析淋巴结中IL-17A+、IFN-γ+细胞的百分比与绝对数量。每个实验重复三次，每次试验每组使用5只小鼠。

，用对照组进行对比（Student检验）。

表1

发病率表明群体中患有EAE的小鼠数量与总数量的比值；发病周期用天表示（平均值±s.e.m）；EAE的最大分支用平均数±s.e.m表示。以上所有数据均来自三次独立实验，每个小组与每次实验中的n=5-6。使用单向ANOVA与Tukey事后比较分析数据。**p0.01与对照组比较（CTRL）；#p0.05和##p0.01与预防组（0.36mM）比较。

表2

发病率表明群体中患有EAE的小鼠数量与总数量的比值；发病周期用天表示（平均值±s.e.m）；EAE的最大分支用平均数±s.e.m表示。以上所有数据均来自三次独立实验，每个小组与每次实验中的n=5-6。使用单向ANOVA与Tukey事后比较分析数据。**p0.01与对照组比较（CTRL）。

图文摘要

重点

HRW减少EAE临床行为学评分

HRW通过抑制CNS炎症浸润和髓鞘脱失改善EAE

HRW通过影响CD4+群体极大缓解EAE症状

HR抑制的Th17在CNS外周免疫器官中的细胞分化

文章检索信息：

Hydrogen-richwaterimprovesneurologicalfunctionalrecoveryinexperimentalautoimmuneencephalomyelitismice

MingZhao,Ming-DongLiu,Ying-YanPu,DanWang,YuXie,Gai-CiXue,YongJiang,Qian-QianYang,Xue-JunSun,LiCao

PII:S-(16)-XDOI:doi:10./j.jneuroim..03.Reference:JNIJournalofNeuroimmunology